Daral J Jackwood

Introducción

La Infección de la Bolsa de Fabricio (IBF) ha sido ampliamente estudiada por varias décadas. La versión original de laboratorio de la vacuna Bursine ‘SAL’ (Salsbury) se ha mantenido en nuestro laboratorio desde 1982. El virus no ha sido modificado. Utilizando pruebas de virus-neutralización cruzada, Jackwood et. al.1 demostró que SAL es una cepa serotipo 1 de IBF

 Estudios de desafio a la vacunación dirigidos por Ismail y Saif indican que SAL podría utilizarse para proteger pollos libres de patógenos específicos (SPF) contra el desafío del virus variante Delaware-E (DEL-E) a una dosis de 102E1D50. Otros virus clásicos no fueron capaces de proteger pollos SPF contra la IBF en este estudio. Estos resultados sugieren que la vacuna Bursine esta inmunológicamente más relacionada a los virus variantes que otros virus vacunales clásicos.

 En la Universidad de Ohio, realizamos estudios para comparar la antigenicidad de Bursine con los virus variantes Delaware. Esta se llevó a cabo preparando una prueba única de ELISA. También examinamos este virus a nivel molecular y se com­paró con varias cepas variantes de IBF. Los resultados se presentan a continuación:

EXPERIMENTO 1

Detección de anticuerpos contra cepas del VIBF y la correlación de los títulos de virus-neutralización y ELISA.

Los virus clásicos STC, LI, BVM y SAL (Bursine), y los virus variantes MD, GLS, DEL-A, DEL-E y el virus Ohio (serotipo II) fueron inoculados en pollos SPF. El antisuero de esas aves fué probado por virus-neutralización (1) contra cuatro antígenos de IBF (fig. 1). Los cuatro antígenos representaron virus clásicos (LI y SAL) y variantes (DEL-A y MD). Los resultados muestran que todos los sueros tenían títulos de anticuerpos neutralizantes excepto los del serotipo II y los controles no vacunados. Todos los títulos fueron relativa­mente altos y variaron por el VIBF del suero y el antígeno del VIBF utilizado en la prueba de virus-neutralización.

 Se diseño y desarrolló una prueba de ELISA para detectar anticuerpos para cepas variantes del VIBF. A esta ELISA se le designó como OSU-ELISA (3). Esta es única debido a que solo la porción VP-2 de la variante DEL-A del VIBF fué uti­lizada como antígeno.

Cuando el suero del estudio fue probado con la OSU-ELISA, se lograron varios resultados (fig 2).Ya que esta ELISA utiliza antígeno de la variante Delaware, se detectaron anticuerpos de todos los virus variante Delaware. Cuando fué probado el antisuero para virus clásicos, solo los anticuerpos a SAL fueron bien detectados. Esto indica que la cepa Bursine está más estrechamente relacionada a la variante Delaware que los otros virus probados. Estos datos confirman los reporta­dos por Ismail y Saif sobre el desafio ante la vacunación (2) anteriormente mencionada

EXPERIMENTO 2

Estudios moleculares de Bursine 2y Bursine Plus.  

 Aunque estos datos inmunológicos y antigénicos indican que la vacuna Bursine parece estar estrechamente relacionada a los virus variantes, queriamos determinar si se podía identificar a nivel molecular esta relación, se realizaron pruebas a nivel molecular, Transcriptasa inversa, Reacción de la Cadena de Polimerasa y restricción enzimática (RT/FCR-RE), para diferenciar las cepas del VIBF clásicas. Encontramos que Bursine 2 y Bursine plus presentaron modelos semejantes a los virus variantes utilizando estas pruebas enzimáticas. Los perfiles moleculares de los virus variantes Delaware y el vacunal Bursine se muestran en la siguiente tabla. El sitio EcoRII (un marcador para la diferenciación del VIBF entre cepas clásicas y variantes) es negativo para cada virus variante. Este sitio es positivo en las cepas clásicas.

 Estudios moleculares posteriores sobre Bursine indican que no es identico a los virus variantes, pero si esta más estrechamente relacionado geneticameflte a los virus variantes que otras cepas clásicas.

 TABLA 1. Resultados de las pruebas RT/PCR-RE para el VIBF.  

Restricción Enzimática

Resumen

Dividir las cepas del VIBF en clásicas y variantes es un importante mecanismo para el diagnóstico de los tipos de virus y la subsecuente selección de una vacuna. Las investi­gaciones muestran que las cepas del VIBF no pueden ser divididas solamente en dos grupos, clásicas o variantes. La antigenicidad e inmunogenicidad de las cepas del VIBF no son ‘blanco o negro”, existen muchas tonalidades de gris.

Bursine ha sido considerada como un virus tipo clásico. Ahora sabemos que esta vacuna tiene propiedades antigéni­cas, inmunogenicaS y moleculares que la distinguen de los virus clásicos.

Referencias.

 Jacwood. D.H., and YM. Saif. Antigenic diversity of infectious bursal dtsease viruses. Aviafl Dis. 31:766-770. 1 967

 Ismail, N.M. and YM Saif. lnmunogeriiCity of infectious bu[sal disease viruses in chickens. Avian Elia. 35:460-469. 1 991

 Jackwood, Di., RU. Jackwood, E.M. Odor, and K.S. Hendersofl. Oepelopment and use of an ELISA for identificatiofl of ant jbodies to variant strainS of infec­tious bursal diseaseviruSeS. Abstr. PP51, 132nd AVMA Meet, pila, 1995.

Jackwood, Di., and RJ. JackwOod. Infectious bursaL disease viruses: Molecular differentiation of anti9enic subtypes among serotypeY viruses. Avian Jis. 38:531-537. 1994.

Interpretación de este documento

 Ef grupo de investigadores de la Universidad de Ohio, es dirigido por el Dr. Mo Salt. incluyendo al Dr. Jackwood y otros importanteS Investigadores. Este grupo ha publicado trabajos sobre IBF desde los SOs y son considerados líderes en esta área.Este documento 8S el resumen de varios trabajos publicados (ver_ referencias)

Los principales puntos de este documento:

 • El sistema de clasificación de cepas “estandar” (o clásicas) y “variantes” es muy simplista. Actualmente existen “varias tonalidades de gris” que mejoran esta clasificación tan rigida. Bursine cubre más tonalidades de gris que otras vacunas probadas.

•Trabajos de desafío muestran que el virus Bursine, cuando se usa como vacuna inactivada es más efectiva contra el desafío de cepas variantes aún a dosis más bajas que otras vacunas estandar.

• La serología, utilizando la ELISA desarrollada por JackwOod, elaborada con la proteina VP-2 de la variante Delaware A, mostró que Bursine tituló más alto que todas las vacunas utilizadas, demostrando su capacidad para neutralizar una gran variedad de tipos antigénicos.VP-2 es el segmento de aminOá­cidos del VIBF que hace la diferencia entre cepas variantes y clásicas. También es la parte del virus que genera protección. Ya que Jackwood usó este segmento para hacer su prueba de ELISA, la reacción a Bursine es más significativa. Los otros virus clásicos tubieron una reacción menor a este antigeno. El artículo también muestra las pruebas de virus.neutraliZaCiófl en la cual la mayoría de las vacunas responden casi igual. 

• Análisis genético. El uso de enzimas para cortar nucleótidos de la VP-2 como un método de clasificación de aislamientos del VIBF fue desarrollado por el Dr. Jackwood. Usando este método. Bursine muestra estar más relacionada a las cepas variantes que Otras cepas clásicas. Los experimentos fueron diseñados para determinar que enzima del grupo de enzimas podía cortar al VIBF. Una enzima, la Ecoll. corta una secuencia de aminoácidos en el grupo estandar pero no al grupo variante. Utilizando este método, Bursine cae dentro del grupo variante.